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豬磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（pERK）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）

試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使用       目的：本試劑盒用于測定豬血清，血漿及相關(guān)液體樣本中磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶 （Perk）的活性。

實驗原理：

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶 （pERK）水平。用純化的豬磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（pERK）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（pERK），再與HRP標記的磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（pERK）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（pERK）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中豬磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（pERK）濃度。

試劑盒組成：

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。

2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?/span>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。

2.批內(nèi)與批間應分別小于9%和15%

檢測范圍：                                             

5 U/L -108 U/L        

保存條件及有效期：

1.試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：6個月